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制備色譜柱的維護方法
發布時間:2021-04-08   點擊次數:164次

制備色譜柱的維護方法

The maintenance of the preparation of chromatographic column

 

一、建議使用保護柱,避免顆粒進入色譜柱,引起堵塞;

 

二、建議選擇合適pH范圍的色譜柱,避免填料溶劑老化;

 

三、緩沖鹽的正確使用:

緩沖鹽通常使用不當會析出,堵塞篩板和填料,使填料板結,柱壓升高,阻礙基質上鍵合相的碳鏈自由舒展,使色譜柱保留能力下降,柱效降低,縮短其使用壽命,緩沖鹽析出后很難去除,因此正確的使用緩沖鹽對延長色譜柱的使用壽命非常重要,具體方法如下:

“使用前過渡,使用后沖洗!”

1)等度條件:制備前后用過渡流動相沖洗柱體積不少于20-30個柱體積,或制備完成后用過渡流動相以1.0mL/min(根據柱規格調整)沖洗過夜;

2)梯度條件:制備前,用與初始流動相組成相同的流動相以工作流速沖洗色譜柱不少于20-30個柱體積,制備后,用該過渡流動相沖洗色譜柱不少于20-30個柱體積,且梯度盡量平緩,避免緩沖鹽析出;

3)過渡流動相:有機相和水相的比例和分析流動相中兩相比例一致,或者水相比例高于分析流動相,徹底不含緩沖鹽;

 

四、避免強保留物質在色譜柱保留:

強保留物質在色譜柱中的累積是一個緩慢的過程,引起峰變寬和拖尾,使柱效下降,保留時間變化,柱壓長高;對復雜樣品很難判斷其是否含有強保留物質,因此要預防這一切的方式,堅持每天分析完成后用純甲醇或乙腈反向沖洗色譜柱20個柱體積以上。

清洗方法:

1)未使用緩沖鹽,每天使用完成后用純甲醇或純乙腈反向沖洗色譜柱20個柱體積以上;

2)使用緩沖鹽,用上述方法去除緩沖鹽后,用純甲醇或純乙腈反向沖洗色譜柱20個柱體積以上;

3)補救方法:水→乙腈→異丙醇(或氯坊)→乙腈→水,每一步需要沖洗不少于30個柱體積。

注意:不要輕易打開柱頭,因為柱頭一旦打開,很難恢復到新柱的水平,因為柱頭打開而造成的檢測后果,客戶自行負責。

 

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